Aulas Prática 4 e 5 - Bactérias gram positiva, motilidade

Olá pessoal!

     Na aula prática continuamos a visualização de bactérias. Realizamos um teste de coloração direta chamado Coloração diferencial de gram e através deste teste podemos separar as bactérias em dois grandes grupos, gram positivo e gram negativo. Esta técnica foi criada em 1884 pelo médico dinamarquês Christian Gram e até hoje é muito utilizada. A diferença entre as bactéricas gram positivas e gram negativas está na parede celular. As  bactérias gram positivas não possuem uma membrana externa e possuem uma camada enorme de peptideoglicano, já as gram negativas possuem membrana externa mas sua camada de peptideoglicano é bem fina. A espessura da parede das gram + é quase o dobro das gram - além de também possuírem um peso seco muito maior. Outras diferenças é em função de susceptibilidade a antibióticos, as gram positivas são resistentes a estreptomicina e tetraciclina e suscetíveis a penicilina já para as gram negativas é o oposto.

Parede celular de bactérias Gram positivo e Gram negativo.

A seguir vamos descrever passo a passo a coloração diferencial de Gram e explicaremos o que ocorre:

1. Fazer um esfregaço da suspensão bacteriana na lamina de vidro e fixar através do calor.
2. Cobrir o esfregaço com cristal violeta por 1 minuto. Neste momento todas as bactérias adquirem coloração violeta.
3. Lavar com água e cobrir o esfregaço com solução de iodo por 30 segundos. A solução de iodo vai fixar a coloração dentro das bactérias.
4. Lavar com álcool. Neste momento o álcool dissolve os lipídeos da parede celular da bactéria gram negativa e com isso a coloração violeta sai destas bactérias, enquanto que na gram positiva o álcool faz com que os poros na camada de peptideoglucano se fechem.
5. Cobrir o esfregaço com safranina por 1 minuto. Este corante vai corar as bactérias que perderam a coloração violeta na lavagem com o álcool e a safranina não consegue entrar nas células que já possuem o cristal violeta em seu interior pois seus poros estão fechados.
6. Lavar com água, secar e observar

Então, ao observarmos a lâmina, se as bactérias que possuírem uma coloração violeta são gram positivas e as bactérias que possuírem coloração avermelhada são gram negativas.

        Após a lâmina de gram fizemos uma lâmina que é capaz de detectar a motilidade bacteriana. Verificar a motilidade de uma bactéria é um indício da presença de flagelos. Esta técnica se chama "gota pendente", é muito simples de se fazer:

1. Colocar uma gota da suspensão bacteriana em uma lamínula
2. inverter a lamínula e colocá-la sobre a lâmina (esta lâmina precisa ter uma concavidade), de tal maneira que a gota fique pendente no centro da área côncava
3. observar ao microscópio

No caso da ausência de flagelo as células estarão paradas, mas caso existam flagelos as bactérias estarão se movimentando, vocês devem visualizar algo semelhante a este vídeo: http://www.youtube.com/watch?v=sxlbGQHqD34 Esta técnica finaliza nossas aulas sobre procariotos!
         

         Pessoal por enquanto ficamos por aqui, qualquer dúvida só deixar um comentário que responderemos! Bons estudos!

Até

Raphael/Aranha